準(zhǔn)確稱取試樣0.5 g±0.01 g于15 mL離心管中，加1 mL甲醇（3.1.1），渦旋30 s，4000 rpm離心2 min或靜置2 min。取200 μL上清液于15 mL離心管中，加入3 mL緩沖液（3.1.6），渦旋混合30 s，作為待測液。
注：試樣提取和凈化（5.2）過程可按照試劑盒說明書操作，不做限定。
5.3 測定步驟
5.3.1 試紙條與金標(biāo)微孔測定步驟
吸取200 μL樣品待測液于金標(biāo)微孔中，抽吸5~10次使混合均勻，室溫溫育5 min；溫育結(jié)束后，將試紙條吸水海綿端垂直向下插入金標(biāo)微孔中，室溫溫育5 min，從微孔中取出試紙條，去掉試紙條下端的吸水海綿，進(jìn)行結(jié)果判定。
注：測定步驟建議按照試劑盒說明書。
5.3.2 檢測卡與金標(biāo)微孔測定步驟
吸取200 μL上述待測液于金標(biāo)微孔中，上下抽吸5~10次使混合均勻。室溫溫育5 min，將反應(yīng)液全部加入到檢測卡的加樣孔中，將金標(biāo)微孔中全部溶液滴加到檢測卡上的加樣孔中，溫育5 min，進(jìn)行結(jié)果判定。
注：測定步驟建議按照試劑盒說明書。
5.4 質(zhì)控試驗
每批樣品應(yīng)同時進(jìn)行空白試驗和加標(biāo)質(zhì)控試驗。
5.4.1 空白試驗
準(zhǔn)確稱取固體空白試樣0.5 g±0.01 g或量取液體空白試樣0.5 mL±0.02 mL于15 mL離心管中，按照5.2和5.3步驟與試樣同法操作。
5.4.2 加標(biāo)質(zhì)控試驗
準(zhǔn)確稱取固體空白試樣0.5 g±0.01 g或量取液體空白試樣0.5 mL±0.02 mL于15 mL離心管中，加入適量標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.3.2），使西地那非參考物質(zhì)濃度為1.0 μg/g或1.0 μg/mL，按照5.2和5.3步驟與試樣同法操作。
準(zhǔn)確稱取固體空白試樣0.5 g±0.01 g或液體空白試樣0.5 mL±0.02 mL于15 mL離心管中，加入適量標(biāo)準(zhǔn)工作液（3.3.4），使他達(dá)拉非參考物質(zhì)濃度為1.0 μg/g或1.0 μg/mL，按照5.2和5.3步驟與試樣同法操作。
6 結(jié)果判定
通過對比控制線（C線）和檢測線（T線）的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視判定示意圖見圖1。結(jié)果判定也可根據(jù)產(chǎn)品說明書進(jìn)行。
6.1 無效
控制線（C線）不顯色，表明不正確操作或試紙條無效。
6.2 陰性結(jié)果
控制線（C線）顯色，檢測線（T線）顏色比控制線（C線）顏色深或檢測線（T線）顏色與控制線（C線）顏色相當(dāng)，均表示樣品中不含待測組分或含量低于方法檢測限，判為陰性。
6.3 陽性結(jié)果
控制線（C線）顯色，檢測線（T線）顏色比控制線（C線）顏色明顯淺或檢測線（T線）不顯色，均表示樣品中待測組分含量高于方法檢測限，判為陽性。
6.4 質(zhì)控試驗要求
空白試驗測定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗測定結(jié)果應(yīng)為陽性。
圖1 目視判定示意圖
7 結(jié)論
當(dāng)檢測結(jié)果為陽性時，應(yīng)對結(jié)果進(jìn)行確證。
8 性能指標(biāo)
8.1 檢出限
固體樣品1.0 μg/g，液體樣品1.0 μg/mL。
8.2 靈敏度
靈敏度≥95%。
8.3 特異性
特異性≥90%。
8.4 假陰性率
假陰性率≤5%。
8.5 假陽性率
假陽性率≤10%。
