近日市場監(jiān)管總局批準發(fā)布了《保健食品中西地那非和他達拉非的快速檢測-膠體金免疫層析法》（KJ201901），本方法規(guī)定了保健食品中西地那非和他達拉非的膠體金免疫層析快速篩查方法。
1 范圍
本方法適用于聲稱具有抗疲勞、調(diào)節(jié)免疫等功能的保健食品中西地那非和他達拉非成分的快速篩查。
2 原理
本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的西地那非和他達拉非等物質(zhì)經(jīng)提取后與膠體金標記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和試紙條或檢測卡中檢測線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測線顏色深淺的變化。通過檢測線與控制線（C線）顏色深淺比較，對樣品中西地那非和他達拉非成分進行定性判定。
3 試劑材料
3.1 試劑
除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的二級水。
3.1.1 甲醇：色譜純。
3.1.2 三羥甲基氨基甲烷，Tris堿。
3.1.3 濃鹽酸。
3.1.4 吐溫-20。
3.1.5 鹽酸溶液：量取濃鹽酸（3.1.3）16.7 mL，用水溶解并稀釋至100 mL。
3.1.6 緩沖液：稱取12.1 g Tris堿（3.1.2），加適量水溶解，混勻，用鹽酸溶液（3.1.5）調(diào)節(jié)pH至8.0，加入5.0 g吐溫-20（3.1.4）攪拌均勻，定容至1000 mL。
3.2 參考物質(zhì)
參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見表1，純度均≥99%。
注：或等同可溯源物質(zhì)。
3.3 標準溶液配制
3.3.1 西地那非標準儲備液（1.0 mg/mL）：精密稱取適量西地那非參考物質(zhì)（3.2），用甲醇（3.1.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為1.0 mg/mL的標準儲備液。-20℃避光保存，有效期1年。
3.3.2 西地那非標準工作液（10 μg/mL）：精密移取適量西地那非標準儲備液（1.0 mg/mL）（3.3.1）分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為10 μg/mL的標準工作液。-20℃避光保存，有效期3個月。
3.3.3 他達拉非標準儲備液（0.5 mg/mL）：精密稱取適量他達拉非參考物質(zhì)（3.2），用甲醇（3.1.1）溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為0.5 mg/mL的標準儲備液。-20℃避光保存，有效期1年。
3.3.4 他達拉非標準工作液（10 μg/mL）：精密移取適量他達拉非標準儲備液（0.5mg/mL）（3.3.3）分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為10 μg/mL的標準工作液。-20℃避光保存，有效期3個月。
3.4 材料
4 設(shè)備與儀器
4.1 設(shè)備
4.1.1 天平：感量為0.1 mg和0.01 g。
4.1.2 渦旋混合器。
4.1.3 移液器：20-200 μL，100-1000 μL，5 mL。
4.1.4 離心機：轉(zhuǎn)速可達4000 r/min以上。
4.2 儀器
4.2.1 讀數(shù)儀：產(chǎn)品配套可使用的檢測儀器（可選）。
4.2.2 環(huán)境條件：溫度10-40℃，相對濕度≤80%。
5 分析步驟
5.1 試樣制備
液體樣品充分混勻，固體樣品充分粉碎混勻。
5.2 試樣提取和凈化
5.2.1 液體基質(zhì)
量取0.5 mL±0.02 mL試樣于15 mL離心管中，加入4 mL緩沖液（3.1.6），渦旋混合30 s，作為待測液。
5.2.2 固體基質(zhì)
5.2.2.1 檢測西地那非
準確稱取試樣0.5 g±0.01 g于15 mL離心管中，加1 mL甲醇（3.1.1），渦旋30 s，4000 rpm離心2 min或靜置2 min。取250 μL上清液于2 mL離心管中，加入750 μL緩沖液（3.1.6），渦旋混合30s，作為待測液。
5.2.2.2 檢測他達拉非
