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保健食品中西地那非和他達(dá)拉非的快速檢測(cè)-膠體金免疫層析法


  來源: 市場(chǎng)監(jiān)管總局 時(shí)間:2019-10-15 編輯:儀商WXF
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近日市場(chǎng)監(jiān)管總局批準(zhǔn)發(fā)布了《保健食品中西地那非和他達(dá)拉非的快速檢測(cè)-膠體金免疫層析法》(KJ201901),本方法規(guī)定了保健食品中西地那非和他達(dá)拉非的膠體金免疫層析快速篩查方法。


1 范圍

本方法適用于聲稱具有抗疲勞、調(diào)節(jié)免疫等功能的保健食品中西地那非和他達(dá)拉非成分的快速篩查。


2 原理

本方法采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理。樣品中的西地那非和他達(dá)拉非等物質(zhì)經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合,抑制抗體和試紙條或檢測(cè)卡中檢測(cè)線(T線)上抗原的結(jié)合,從而導(dǎo)致檢測(cè)線顏色深淺的變化。通過檢測(cè)線與控制線(C線)顏色深淺比較,對(duì)樣品中西地那非和他達(dá)拉非成分進(jìn)行定性判定。


3 試劑材料

3.1 試劑

除另有規(guī)定外,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T 6682規(guī)定的二級(jí)水。

3.1.1 甲醇:色譜純。

3.1.2 三羥甲基氨基甲烷,Tris堿。

3.1.3 濃鹽酸。

3.1.4 吐溫-20。

3.1.5 鹽酸溶液:量取濃鹽酸(3.1.3)16.7 mL,用水溶解并稀釋至100 mL。

3.1.6 緩沖液:稱取12.1 g Tris堿(3.1.2),加適量水溶解,混勻,用鹽酸溶液(3.1.5)調(diào)節(jié)pH至8.0,加入5.0 g吐溫-20(3.1.4)攪拌均勻,定容至1000 mL。

3.2 參考物質(zhì)

參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量見表1,純度均≥99%。

注:或等同可溯源物質(zhì)。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.3.1 西地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0 mg/mL):精密稱取適量西地那非參考物質(zhì)(3.2),用甲醇(3.1.1)溶解并稀釋至刻度,搖勻,配制成濃度為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-20℃避光保存,有效期1年。

3.3.2 西地那非標(biāo)準(zhǔn)工作液(10 μg/mL):精密移取適量西地那非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0 mg/mL)(3.3.1)分別置于10 mL容量瓶中,用甲醇(3.1.1)稀釋至刻度,搖勻,配制成濃度為10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。-20℃避光保存,有效期3個(gè)月。

3.3.3 他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(0.5 mg/mL):精密稱取適量他達(dá)拉非參考物質(zhì)(3.2),用甲醇(3.1.1)溶解并稀釋至刻度,搖勻,配制成濃度為0.5 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。-20℃避光保存,有效期1年。

3.3.4 他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)工作液(10 μg/mL):精密移取適量他達(dá)拉非標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(0.5mg/mL)(3.3.3)分別置于10 mL容量瓶中,用甲醇(3.1.1)稀釋至刻度,搖勻,制成濃度為10 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。-20℃避光保存,有效期3個(gè)月。

3.4 材料

西地那非膠體金免疫層析試劑盒及配套的試劑(可選),適用基質(zhì)為保健食品。


他達(dá)拉非膠體金免疫層析試劑盒及配套的試劑(可選),適用基質(zhì)為保健食品。



4 設(shè)備與儀器

4.1 設(shè)備

4.1.1 天平:感量為0.1 mg和0.01 g。

4.1.2 渦旋混合器。

4.1.3 移液器:20-200 μL,100-1000 μL,5 mL。

4.1.4 離心機(jī):轉(zhuǎn)速可達(dá)4000 r/min以上。

4.2 儀器

4.2.1 讀數(shù)儀:產(chǎn)品配套可使用的檢測(cè)儀器(可選)。

4.2.2 環(huán)境條件:溫度10-40℃,相對(duì)濕度≤80%。


5 分析步驟

5.1 試樣制備

液體樣品充分混勻,固體樣品充分粉碎混勻。

5.2 試樣提取和凈化

5.2.1 液體基質(zhì)

量取0.5 mL±0.02 mL試樣于15 mL離心管中,加入4 mL緩沖液(3.1.6),渦旋混合30 s,作為待測(cè)液。

5.2.2 固體基質(zhì)

5.2.2.1 檢測(cè)西地那非

準(zhǔn)確稱取試樣0.5 g±0.01 g15 mL離心管中,加1 mL甲醇(3.1.1),渦旋30 s,4000 rpm離心2 min或靜置2 min。取250 μL上清液于2 mL離心管中,加入750 μL緩沖液(3.1.6),渦旋混合30s,作為待測(cè)液。

5.2.2.2 檢測(cè)他達(dá)拉非

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